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        人視網膜神經膠質瘤細胞

        更新時間:2018-06-15點擊次數:366

        人視網膜神經膠質瘤細胞

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        選購方法

        細胞株

          Q1. 培養用液pH對細胞生長的影響

          由于,大多數細胞適宜pH為7.2~7.4,偏離此范圍對細胞將產生有害的影響。各種細胞對pH的要求也不*相同,原代培養細胞一般對pH變動耐受差,無限細胞系耐受力強。


          但總體來說,細胞耐酸性比耐堿性強一些,偏酸環境中更利于細胞生長。因此,我們在配制培養用液時,可把液體的pH稍微調得偏酸一些。液體在經過0.10um或0.22um濾膜過濾時,溶液的pH還會向上浮動0.2左右。



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          Q2. 液體培養基中谷氨酰胺的作用,及使用方法。

          幾乎所有的細胞對谷氨酰胺有較高的要求,細胞需要谷氨酰胺合成蛋白質,在缺少谷氨酰胺時,細胞生長不良而死亡。所以,各種培養液中都含有較大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不穩定,應置-20 ?C冰凍保存,用前加入培養基中。加有谷氨酰胺的液體培養基4 ?C 冰箱儲存兩周以上時,應重新加入原來量的谷氨酰胺。基礎醫學細胞中心在其服務項目中配制分裝了高濃度(100倍)的谷氨酰胺溶液(1ml/支)。每支1ml的谷氨酰胺加到99ml*培養基中,其終濃度為2mM/ml培養基。包裝為粉紅色,-24?C保存。


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          Q3.細胞計數及存活測試
        1、原理:
        (1)計算細胞數目可用血球計數盤或是Coultercounter粒子計數器自動計數。
        (2)血球計數盤一般有二個chambers,每個chamber中細刻9個1mm2大正方形,其中4個角落之正方形再細刻16個小格,深度均為0.1mm。當chamber上方蓋上蓋玻片后,每個大正方形之體積為1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用時,計數每個大正方形內之細胞數目,乘以稀釋倍數,再乘以104,即為每ml中之細胞數目。
        (3)存活測試之步驟為dyeexclusion,利用染料會滲入死細胞中而呈色,而活細胞因細胞膜完整,染料無法滲入而不會呈色。一般使用藍色之trypan blue染料,如果細胞不易吸收trypan blue,則用紅色之Erythrosin bluish。計算細胞活率:活細胞數/(活細胞數+死細胞數)×100%。計數應在臺盼蘭染色后數分鐘內完成,隨時間延長,部分活細胞也開始攝取染料;因為臺盼蘭對蛋白質有很強的親和力,用不含血清的稀釋液,可以使染色計數更為準確。


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          Q4.細胞特性
        在細胞培養之前,我們要了解一下你所要養細胞的基本特性,這點可以從細胞的產品說明書或者從ATCC細胞庫查詢。除此之外我們還要知道每管細胞的數量,建議分裂或傳代的比例,和已知細胞的傳代代次等信息。


          Q5.準備培養基
        復蘇細胞時需要準備合適的培養基,血清和細胞生長所需的添加劑。大部分培養細胞所用的培養體系,可以在訂購細胞系時獲得。
        雖然大多數細胞系可以在不止一種培養基中生長,但是當培養基改變時,細胞的性質也會變化。因此,使用細胞庫推薦的培養基來培養細胞會獲得的效果。


          Q6.開啟凍存管
        1.準備一個培養瓶,加入適宜細胞培養的培養基,液體體積按照說明書的推薦配置,并平衡培養基的溫度和pH(CO2)。 
        2.在37℃水浴中或細胞的正常生長溫度下將凍存管輕輕搖動。解凍要快,約2分鐘或直到冰晶融化即可。
        3.從水浴中取出凍存管并用浸泡或噴灑70%乙醇的方式來消毒。進一步的操作均需在無菌操作臺中嚴格無菌條件下進行。
        4.擰開凍存管的管帽并將內容物轉移到一個含有9 ml推薦培養基的無菌離心管中。通過溫和離心(125×g 10 min)除去冷凍保護劑(DMSO)。棄去上清,并用1或2 ml*培養基重懸細胞。將這些細胞懸液轉移到含有*培養基的培養瓶中并輕輕搖動以*混勻。
        5.培養24小時后檢查細胞狀態并在需要時進行傳代。


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          Q7. 培養用液pH對細胞生長的影響

          由于,大多數細胞適宜pH為7.2~7.4,偏離此范圍對細胞將產生有害的影響。各種細胞對pH的要求也不*相同,原代培養細胞一般對pH變動耐受差,無限細胞系耐受力強。


          但總體來說,細胞耐酸性比耐堿性強一些,偏酸環境中更利于細胞生長。因此,我們在配制培養用液時,可把液體的pH稍微調得偏酸一些。液體在經過0.10um或0.22um濾膜過濾時,溶液的pH還會向上浮動0.2左右。


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